基于多層DNA放大回路檢測甲基化DNA的比例型電化學傳感器的構(gòu)建方法，包括：將亞甲基藍標記的信號探針與固定探針雜交，固定到金電極表面制備傳感基底；通過四價發(fā)夾探針，構(gòu)建多層DNA放大回路；制備比例型電化學傳感界面，檢測血清中的循環(huán)甲基化DNA。本發(fā)明的基于多層DNA放大回路檢測甲基化DNA的比例型電化學傳感器，利用DNAzyme和催化發(fā)夾自組裝反應(yīng)優(yōu)異的信號放大能力，結(jié)合比例法對復雜檢測環(huán)境的自我矯正能力，構(gòu)建了簡便、靈敏的DNA甲基化電化學傳感平臺，該方法對相關(guān)臨床疾病的早期診斷及遺傳信息機理研究具有重要意義。