本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)凝血酶的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器及其制備方法，該方法包括：玻碳電極預(yù)處理；在預(yù)處理的玻碳電極上涂覆二茂鐵功能化石墨烯；制備Ru(bpy)32+標(biāo)記的凝血酶適配體溶液；將涂覆修飾后的電極在標(biāo)記后的適配體溶液中培育一段時(shí)間，即得到所述生物傳感器。由于二茂鐵對(duì)Ru(bpy)32+具有信號(hào)淬滅作用，該傳感器處于“光信號(hào)關(guān)閉”狀態(tài)。當(dāng)將其浸入凝血酶檢測(cè)液中后，傳感器上的適配體會(huì)與凝血酶發(fā)生特異性結(jié)合，因此發(fā)生構(gòu)象變化，從二茂鐵石墨烯表面脫吸附，導(dǎo)致二茂鐵光淬滅基團(tuán)與Ru(bpy)32+發(fā)光基團(tuán)分離，淬滅效應(yīng)減弱，傳感器轉(zhuǎn)化為“光信號(hào)開(kāi)啟”狀態(tài)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)凝血酶的特異性檢測(cè)。本發(fā)明的生物傳感器檢測(cè)凝血酶時(shí)穩(wěn)定性好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單方便。