本發(fā)明公開了一種DNA合成測序方法和測序系統(tǒng)，所述方法包括：通過水溶性雙功能連接單元將引物P1連接于基體表面；在基體表面加入含待測DNA模板的溶液，然后進行等溫表面放大反應；再將引物Pe加入基體表面，然后在基體表面加入四種堿基的熒光標記可逆終止劑的延伸反應溶液，進行延伸反應；然后對延伸后的DNA雙鏈進行成像之后，加入相應的化學試劑，使熒光標記可逆終止劑的連接單元斷裂。重復DNA鏈延伸和斷裂步驟，完成多次循環(huán)測序，即得待測DNA模板核苷酸的堿基序列。本發(fā)明測序方法可用于DNA高通量合成測序，在所述測序條件下實驗結果其讀長至少為73堿基；如果雙端測序，其讀長至少為146，準確率至少為99.98％。