本發(fā)明公開(kāi)了結(jié)合高壓分子動(dòng)力學(xué)模擬、自由能計(jì)算改善水解酶魯棒性，屬于計(jì)算化學(xué)、生物信息學(xué)、基因工程以及蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域。本發(fā)明方法先通過(guò)高壓擾動(dòng)結(jié)合分子動(dòng)力學(xué)模型模擬計(jì)算，尋找強(qiáng)魯棒性相關(guān)區(qū)域和關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)，再對(duì)關(guān)鍵區(qū)域上的氨基酸進(jìn)行虛擬飽和突變，構(gòu)建突變體庫(kù)，然后通過(guò)用多尺度自由能計(jì)算軟件從蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)、蛋白質(zhì)熱力學(xué)、預(yù)測(cè)算法上對(duì)上述突變體進(jìn)行穩(wěn)定性預(yù)測(cè)，經(jīng)多輪虛擬選擇盡可能排除假陽(yáng)性突變體。利用上述方法構(gòu)建篩選水解酶突變體，陽(yáng)性突變體頻率高達(dá)62.5％，有效降低篩選工作量，獲得的突變體魯棒性強(qiáng)，具有很高的工業(yè)應(yīng)用潛力。