本發(fā)明公開了用于常溫等溫核酸大片段體外擴增的蛋白酶，包括（1）重組酶（SEQ?ID?No.35）；（2）單鏈結(jié)合蛋白（SEQ?ID?No.36）；（3）DNA聚合酶（SEQ?ID?No.37）；（4）輔助蛋白（SEQ?ID?No.38）。本發(fā)明還公開了用于常溫等溫核酸大片段體外擴增的試劑以及擴增方法。該擴增方法是一種利用多種工程酶與相關(guān)化學組分的協(xié)同作用，在常溫且恒定溫度的條件下，于體外快速完成核酸大片段的特異性擴增的方法。該方法今后可廣泛應(yīng)用于基因測序、環(huán)狀質(zhì)粒擴增與全基因組擴增等領(lǐng)域中，可在簡化分子操作流程、提高研究進程等方面具有巨大的應(yīng)用前景。