本發(fā)明公開了一種fruB基因過表達的重組梭菌、其構建方法及應用，屬于生物化工技術領域。所述fruB基因的序列為SEQ?ID?NO.1，fruB基因編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。所述梭菌的構建方法包括(1)fruB基因過表達重組質(zhì)粒構建；(2)過表達重組質(zhì)粒構建的甲基化；(3)fruB基因過表達重組菌株構建；(4)重組菌株丁醇發(fā)酵性能檢測。本發(fā)明將fruB基因在C.acetobutylicum?ATCC?824中過表達能顯著提高丁醇發(fā)酵果糖、果糖與葡萄糖混合糖以及菊芋水解液利用率及丁醇產(chǎn)量。