本發(fā)明涉及一種核酸酶放大的高靈敏電化學(xué)免疫分析方法。通過Au-S鍵合作用,在金電極表面自組裝亞甲基藍(lán)(MB)標(biāo)記的發(fā)夾DNA,構(gòu)成電化學(xué)免疫傳感界面。以Mg2+、DNA1-抗體1、DNA2-抗體2、DNA3-抗體3的混合溶液為檢測(cè)液,在目標(biāo)蛋白質(zhì)存在時(shí),抗體1、抗體2、抗體3同時(shí)識(shí)別目標(biāo)蛋白質(zhì)形成免疫復(fù)合物,使得DNA1、DNA2與DNA3相互靠近進(jìn)行鄰位雜交,形成Mg2+依賴性核酸酶,進(jìn)而催化裂解傳感界面上的發(fā)夾DNA,導(dǎo)致MB脫離電極表面,氧化電流減小。通過檢測(cè)MB電流的變化,實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定。該免疫分析方法利用三個(gè)DNA-抗體偶合物鄰位形成核酸酶放大檢測(cè)信號(hào),提高了檢測(cè)靈敏度和選擇性,同時(shí)可對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、一步化檢測(cè),具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。
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