本發(fā)明公開了一種基于連續(xù)識別與級聯(lián)放大系統(tǒng)的血漿游離DNA甲基化電化學檢測方法及試劑盒，使用不同濃度的生物素標記的甲基化特異性引物，通過此不對稱的MSP鑒別亞硫酸氫鹽修飾的基因組樣品中的甲基化DNA而不是非甲基化等位基因；利用聚合酶的擴增能力，加入不同濃度的引物，產(chǎn)生大量具有生物素標記的單鏈擴增子，減少了引物二聚體的干擾；通過修飾在金電極表面上的自組裝四面體上的DNA納米結(jié)構(gòu)探針捕獲這些擴增子；通過生物素?親和素結(jié)合作用捕獲辣根過氧化物酶綴合的抗生物素蛋白，利用酶的催化過程產(chǎn)生電化學信號。該方法具有良好的靈敏度，能檢測單個拷貝的甲基化DNA分子，同時具有良好的特異性，能夠在有大量非甲基化DNA干擾下檢測出0.1％的甲基化。