本發(fā)明涉及一種電化學發(fā)光夾心生物傳感器及其制備與應(yīng)用，包括以下步驟：先采用恒電位法制備金納米?石墨烯修飾的玻碳電極；再制備Ru(bpy)32+標記的信標Ru?TBA2?AuNPs；將金納米?石墨烯修飾的玻碳電極浸入含有巰基修飾的TBA1溶液中培育2～8?h，然后在含有凝血酶溶液中培育20?min；最后在Ru?TBA2?AuNPs中培育20?min。本發(fā)明的電化學發(fā)光夾心生物傳感器主要應(yīng)用于凝血酶的檢測。本發(fā)明的傳感器具有良好的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、對凝血酶具有很強的特異性，不易受到檢測樣品中其他物質(zhì)的干擾；靈敏度高、檢測快速、操作簡便等特點。對凝血類藥物的研發(fā)有一定的幫助。