本發(fā)明涉及一種羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品的分離制備方法,以重量含量30～97%的羥基積雪草甙提取物為原料,以制備型高效液相色譜為分離手段,以一定比例的甲醇-水溶液為洗脫體系,獲得純度大于98%的羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品;工藝步驟有:樣品預(yù)處理,色譜柱處理,進(jìn)樣,洗脫,在線(xiàn)監(jiān)測(cè),收集含有羥基積雪草甙的洗脫液,減壓濃縮羥基積雪草甙洗脫液至干,即得羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品。經(jīng)高效液相色譜法監(jiān)測(cè),羥基積雪草甙的含量可達(dá)到98%以上。