本發(fā)明涉及納米催化、生物醫(yī)學(xué)、分析化學(xué)領(lǐng)域，具體包括一種乙酰膽堿檢測試紙條及其應(yīng)用。在試紙條上原位生成具有仿過氧化物酶活性的納米材料并修飾上乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶，測試樣品中的乙酰膽堿可在上述試紙條上串聯(lián)酶的催化下生成過氧化氫使有機(jī)顯色試劑顯色從而實(shí)現(xiàn)對乙酰膽堿的定性檢測，并可通過層析現(xiàn)象有效排除干擾。通過手機(jī)拍照及手機(jī)軟件分析可實(shí)現(xiàn)對乙酰膽堿的定量檢測。該發(fā)明可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢測、生化分析等領(lǐng)域。