本發(fā)明涉及一種基于近紅外熒光分子與納米微球標記的方法以及基于近紅外熒光納米微球的免疫層析定量檢測試劑。本發(fā)明將近紅外熒光與納米微球連接，制備了基于近紅外熒光納米微球的免疫層析試紙條。在檢測過程中，利用紅外光掃描儀，采用近紅外光分別掃描質控線和樣品線，用質控線熒光強度校正檢測線熒光強度后代入熒光分析儀中的標準曲線，即可分析檢測標本中的待測物的濃度。與近紅外熒光分子直接與檢測分子連接相比，近紅外熒光納米微球免疫層析顯著的提高了檢測靈敏度，降低了背景熒光強度。該標記方法和試劑可以在微生物檢測、食品安全檢測、毒品檢測以及危險化學品快速檢測中應用。