本發(fā)明涉及一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法；所述試劑盒包括：C酶瓶、T酶瓶、C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯均設(shè)有含有乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯(lián)苯胺的凍干吸水墊。本發(fā)明還涉應(yīng)用前述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。本發(fā)明利用乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶及過氧化物酶為催化體系，將氯化乙酰膽堿水解氧化后的產(chǎn)物與魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光效應(yīng)。建立靈敏地測試農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的方法。本發(fā)明有具檢測速度快、操作過程簡單、穩(wěn)定性及重復(fù)性好、不需要昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，非常適合于在農(nóng)貿(mào)市場進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥的現(xiàn)場監(jiān)測。