本發(fā)明提供了一種活細胞線粒體中還原型谷胱甘肽的濃度測定方法，屬于生物分析化學技術(shù)領(lǐng)域，解決了現(xiàn)有技術(shù)無法精準測定正常細胞線粒體中GSH濃度的問題。該方法包括如下步驟：分別制備包含9位N?取代嗎啉基團的派羅寧類衍生物的熒光探針以及與所述熒光探針適配的檢測溶液；將所述熒光探針放入檢測溶液中，獲得含有熒光探針的檢測溶液；將含有熒光探針的檢測溶液加入待檢測細胞培養(yǎng)液中，在CO2培養(yǎng)箱中孵育預(yù)設(shè)時間；孵育完成后，用預(yù)設(shè)波長的光照射加入檢測溶液后的待檢測細胞培養(yǎng)液，監(jiān)測兩個不同發(fā)射通道的熒光發(fā)射強度，確定所述兩個發(fā)射通道的熒光強度比率，得出待檢測細胞線粒體中還原型谷胱甘肽的濃度。實現(xiàn)了檢測精度可達10×10?9mol/L數(shù)量級。