本發(fā)明公開了一種測定根系分泌物中有機酸含量的方法，屬于化學分析技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明構(gòu)建了一種同時微量定量分析根系分泌物中多種有機酸的HPLC方法，首先采用水培法收集植物的根系分泌物，收集的根系分泌物進行凍干，得到根系分泌物粉末，整個收集和凍干過程所用的儀器工具溶劑等都事先進行滅菌處理，這樣可以減少微生物的影響，便于長期儲存。定量分析根系分泌物中有機酸時，取根系分泌物粉末溶于甲醇，靜置震蕩后加入無菌水，再次震蕩后進行過濾，最后對濾液進行HPLC分析。本發(fā)明的HPLC方法可以同時定量12種有機酸，并在10min內(nèi)測定完畢，定量限普遍低于1mg/L，適用于微量定量分析根系分泌物中的有機酸。