本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種地奈德及相關雜質(zhì)的分離與測定方法；所述的分離方法是在固定相的基礎上，采用乙腈水溶液為流動相進行洗脫分離，所述固定相的極性小于流動相的極性，該方法有效的分離地奈德及相關雜質(zhì)，有助于地奈德的分離純化；基于該分離方法的反相HPLC法是采用高效液相色譜儀分析測定地奈德供試品溶液中各物質(zhì)的峰面積，按照峰面積歸一化或自身對照法計算各雜質(zhì)的相對含量，所采用的色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠填料的色譜柱，采用的流動相為乙腈水溶液，該方法不僅能夠?qū)崿F(xiàn)地奈德及相關雜質(zhì)的有效分離，還克服了USP38版地奈德原料藥質(zhì)量標準存在的缺陷，更適用于地奈德原料藥及其制劑的質(zhì)量控制。