本方法公開了一種測定硫普羅寧濃度的方法。以由結構式(1)表示的對溴苯乙酰基溴對樣品中硫普羅寧進行化學衍生化之后,再采用高效液相色譜法測定硫普羅寧衍生物。此方法能排除其他物質對硫普羅寧的干擾,采用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器即可對硫普羅寧進行高效液相色譜測定,線性范圍10～1000ng,最小檢出量3.3ng。血漿中硫普羅寧回收率70%以上,RSD小于15%。本發(fā)明可十分準確地用于血漿、尿液、腦脊液、生物組織等生物材料以及原料藥和制劑中硫普羅寧濃度的定量測定。