本發(fā)明公開(kāi)了可活體在線同時(shí)測(cè)定抗壞血酸與鎂離子的微流控芯片及其制備方法與應(yīng)用。該微流控芯片,包括:緊密結(jié)合的設(shè)有微通道的模板和導(dǎo)電玻璃基底;在所述基底上與微通道相應(yīng)的部位,沿微通道方向設(shè)有依次排列的與待測(cè)組分?jǐn)?shù)目相同的工作電極;在模板上微通道的一個(gè)端口處設(shè)有液流引入通道及入口,另一個(gè)端口處設(shè)有液流引出通道及出口,對(duì)電極設(shè)置在設(shè)有液流出口的微通道的端口;在所述模板上,在所述主液流引入通道和所述液流引出通道之間,對(duì)應(yīng)所述微通道的部位設(shè)有參比電極。利用該微流控芯片消除了同時(shí)檢測(cè)抗壞血酸與鎂離子時(shí)兩者之間存在的交叉干擾,進(jìn)而與微透析活體在線檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)鼠腦內(nèi)抗壞血酸與鎂離子的同時(shí)在線電化學(xué)檢測(cè)。