本發(fā)明提出了一種快速高通量的基因定點(diǎn)誘變方法,其步驟為:1.構(gòu)建了一個(gè)表達(dá)DPNI限制性內(nèi)切酶的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的用于定點(diǎn)誘變的菌株;2.根據(jù)需要對基因待突變的位置進(jìn)行序列分析,設(shè)計(jì)部分重疊(10～16NT)的PCR誘變引物;3.反向PCR擴(kuò)增;4.擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物直接化學(xué)法轉(zhuǎn)化上述構(gòu)建的表達(dá)DPNI的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的菌株,這樣經(jīng)過DPNI體內(nèi)篩選就可以得到攜有預(yù)定突變的質(zhì)粒。本發(fā)明能夠真正做到簡單快速的定點(diǎn)誘變,且不需訂購特殊修飾的引物,不需要對PCR后的產(chǎn)物進(jìn)行任何處理步驟(酶切連接,體外雜交,膠回收和體外DPNI的消化處理等)就能方便迅速地構(gòu)建突變質(zhì)粒。