本發(fā)明公開了一種多齒化氨基極性內(nèi)嵌型混合模式高效液相色譜填料及其制備方法和應(yīng)用，通過在硅球表面鍵合聚乙烯亞胺和環(huán)氧丙基苯基醚得到一種多齒化氨基極性內(nèi)嵌型混合模式高效液相色譜填料。本發(fā)明制備的填料既具備硅膠填料的機械強度高、物理和化學(xué)性能好等優(yōu)異的物化結(jié)構(gòu)；同時將制備的填料作為高效液相色譜柱的固定相時，能分別發(fā)生反相/親水/離子交換作用；具有分離速度快、分離選擇性高等優(yōu)點，能夠彌補單一模式的色譜在復(fù)雜樣品分析中的不足，提高分離效率與分離速度，同時能夠?qū)崿F(xiàn)實際體系中苯二胺異構(gòu)體的快速、有效的分離。