本發(fā)明公開了一種基于膽固醇修飾的單芘熒光探針及其合成方法和應(yīng)用。該熒光探針的結(jié)構(gòu)式為式中n的取值為2或3或4，其是將芘經(jīng)由含寡聚乙氧基和仲胺基團(tuán)的親水性連接臂介導(dǎo)結(jié)合膽固醇基團(tuán)制備而成。本發(fā)明熒光探針具有化學(xué)穩(wěn)定性好、響應(yīng)速度快、靈敏度高、響應(yīng)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，能夠連續(xù)、實(shí)時(shí)、在線的測定蛋白質(zhì)中的胃蛋白酶和卵清蛋白，并且檢出限分別可達(dá)到202nmol/L、131nmol/L。