本發(fā)明提供了一種優(yōu)化的小片段RNA載體的改造方案及該載體的配套制備方法，包括以下步驟：1.以晶賽公司的編碼多條shRNA質(zhì)粒載體pEGFP6－1為骨架進(jìn)行啟動(dòng)子序列，生物元件布局及篩選基因插入等一系列改造，從而構(gòu)建出優(yōu)化的編碼小片段RNA載體pGenesil－1.2；2.化學(xué)合成編碼各小片段RNA所需的DNA模板并構(gòu)建入pGenesil－1.2中，然后利用此系統(tǒng)中的雙重篩選方案篩選克隆并經(jīng)測序鑒定完成構(gòu)建工作；本發(fā)明有效克服了當(dāng)前科研領(lǐng)域及市場中常規(guī)制備小片段RNA載體所面臨的啟動(dòng)子3＇端突變、構(gòu)建過程中鑒定困難、合成模板DNA引物長和成本高等問題，同時(shí)以一種優(yōu)化的結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄小片段RNA的啟動(dòng)子有更高的轉(zhuǎn)錄效率。