本發(fā)明公開了生產(chǎn)MSTN雙側(cè)基因敲除的雙肌性狀體細胞克隆豬的方法，其利用高效簡便的基因修飾技術(shù)TALEN技術(shù)，設(shè)計構(gòu)建能高效敲除MSTN基因的質(zhì)粒；通過電轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染豬胎兒成纖維細胞，磁珠分選陽性細胞作為供體細胞，化學輔助去核方法去核后進行體細胞核移植；經(jīng)胚胎移植確定妊娠后26-36天取出胎兒進行基因測序，以MSTN雙側(cè)基因敲除胎兒細胞作為供體細胞再次體細胞核移植，胚胎移植；足月分娩后免疫組化及形態(tài)學觀察，確定為雙肌性狀克隆豬。獲得MSTN-/-雙側(cè)敲除的雙肌性狀克隆公豬，取精液對發(fā)情母豬進行人工受精，獲得大量雙肌豬。本發(fā)明工藝簡單，易于實施，且可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)雙肌豬，利于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和醫(yī)學研究。