本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了兔抗人類免疫缺陷病毒Ⅰ型P24抗原(HIV?1P24)單克隆抗體OTIR5D12和OTIR2C5,所述的抗體是利用分選特異B細(xì)胞并培養(yǎng)篩選及分子克隆重組產(chǎn)生。所述兔單克隆抗體OTIR5D12和OTIR2C5的免疫原為原核細(xì)胞大腸桿菌表達(dá)的HIV?1P24全長(zhǎng)蛋白，這2個(gè)兔單克隆抗體可以識(shí)別HIV?1P24蛋白表面的不同抗原決定簇，其OTIR5D12抗體輕鏈(VL)的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；OTIR5D12抗體的重鏈(VH)的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。其OTIR2C5輕鏈(VL)的氨基酸序列如SEQIDNO.11所示；OTIR2C5的重鏈(VH)的氨基酸序列如SEQIDNo.12所示。本發(fā)明的抗人類免疫缺陷病毒Ⅰ型P24抗原(HIV?1P24)的兔單克隆抗體可應(yīng)用于生物樣本中HIV?1P24蛋白或慢病毒顆粒滴定的測(cè)定，包括但不限于雙抗體夾心ELISA或化學(xué)發(fā)光法試劑盒的制備。