本發(fā)明公開了一種檢測microRNA的電化學發(fā)光傳感器及其制備方法和應用，該電化學發(fā)光傳感器包括玻碳電極、電化學發(fā)光劑、氧化石墨烯和核酸探針，所述玻碳電極表面依次修飾了電化學發(fā)光劑和氧化石墨烯，所述核酸探針通過與氧化石墨烯結合固定于玻碳電極表面。本發(fā)明將制備的電化學發(fā)光傳感器與目標物溶液進行孵育，在若干次的催化發(fā)夾自組裝循環(huán)反應后，DNA探針脫離電極表面，因此電極的電化學發(fā)光信號呈增長趨勢，并以此測定目標的濃度，本發(fā)明的傳感器應用于microRNA?21的定量檢測，具有特異性好、靈敏度高、線性范圍寬，且具有成本低廉的優(yōu)勢。