本發(fā)明為一種電化學生物傳感器及其制作方法，本生物傳感器在基板的正面和反面各有不同的正面導電層和反面導電層，還有不同的正面試劑塊和反面試劑塊，2片蓋板分別覆蓋正反面試劑塊。正反面試劑塊包含至少一種與樣品反應的酶和一種電子媒介體。正面導電層有3個電極，反面導電層有2個電極。制作方法為：基板的正反面印刷或磁控濺射導電層，導電層上印刷絕緣層，絕緣層前端凹槽內放置正反面試劑塊；與絕緣層和試劑塊粘貼的墊高層表面貼合蓋板。本發(fā)明同時測試一份樣本中兩種成份，用戶減少采血；適用于葡萄糖、尿酸、膽固醇等項目的檢測；正反面導電層的電極數不一致，利于辨認，方便正確地插入測試儀器。