本發(fā)明公開一種硫代縮酮連接單元及其合成方法、用途；所述硫代縮酮連接單元的結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示 : 其中，R＝?OH或者?COOH；R1與R2的滿足如下條件中的一種：(1)R1＝R2＝甲基；或，(2)R1＝苯基、對甲氧基苯基、2, 4, 6?三甲氧基苯基、萘基或?qū)籽趸粱?，R2＝H；或，(3)R1、R2共同構(gòu)成環(huán)己基或環(huán)戊基。該單元與核苷酸及熒光素連接得到的熒光素標記核苷酸可用于DNA測序。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明連接單元的可逆終止劑用于DNA測序時，其延伸效率接近100％，并且在模板為連續(xù)多個相同堿基時，一次只延伸一個可逆終止劑；其合成所需原料簡單易得，合成過程均為常規(guī)化學反應，可用于大規(guī)模推廣使用。