本發(fā)明公開了一種三元穿梭載體pTY，其序列如SEQ?ID?NO:11所示。還公開了一種利用pTY構(gòu)建柑桔黃化脈明病毒(CYVCV)侵染性克隆的方法，包括如下步驟：(1)制備CYVCV全長cDNA；(2)采用限制性內(nèi)切酶Stu?I、Sma?I酶切如SEQ?ID?NO:11所示三元穿梭載體pTY，得到pTY線性化的載體；(3)酵母轉(zhuǎn)化伴隨的同源重組：采用醋酸鋰法將線性化載體pTY與CYVCV全長cDNA共轉(zhuǎn)化酵母菌YPH501；(4)侵染性克隆鑒定：同源重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌C58C1，篩選獲得CYVCV侵染性克隆。本發(fā)明有效克服了病毒全長cDNA片段在大腸桿菌中產(chǎn)生毒性或不穩(wěn)定導(dǎo)致克隆失敗的現(xiàn)象。